一代神医。他乐于治病行医，医术高超，坚持孜孜不倦地进取，研制麻沸散、自创五禽戏、开创外科手术先河，只为更多地减轻患者病痛、强健百姓体魄；他医德高尚，游医天下，免费为穷苦百姓行医治病，深得百姓的尊重与爱戴；身为举世闻名的神医，他视功名于粪土，不把为权贵看病置于为百姓看病之上，甚至因此得罪当权者。

谯郡县县令之女。与华佗一见钟情，但是由于父亲的阻扰和吴成的故意破坏，两人分手，明心也被吴成下药眼睛失明。县令被人陷害后处死，家道中落的明心陷入悲惨的境地。早已相识的华佗为明心医治眼睛进而让两人再次互生情愫，之后明心一直陪伴在华佗身边。

东汉权臣，一代枭雄。曹操在刺杀董卓失败后逃回老家谯郡，被华佗所救，结为推门之谊的好兄弟。在华佗的感召与刺激下，誓言永不称帝。但最终因政治理念的不同，和华佗分道扬镳，并于晚年“下令”杀死华佗。

华佗指腹为婚的妻子。虽然嫁给华佗为妻，而华佗却与明心私定终身，惠娘看到后很失落。吴成却替惠娘抱不平。惠娘怀有身孕却在在破庙艰难度日，在吴成帮助下重返华府，但惠娘却很快因意外流产出血而亡。

华佗的大师兄，谯郡县的医官。虽然医术高超，但是爱占小便宜有时还会坑蒙拐骗。他习惯游走于市井，悠哉处事、乐观混世的生活态度并不被身边亲朋看好。然而他对率真俏皮的喜莲一往情深，可以毫无保留地倾尽所有。

俏皮泼辣的萌妹子，“野蛮女友”式人物。一直陪伴在明心身边。她率真的性格吸引了胡半仙的注意，此后对其爱得一发不可收拾。最后因卷入曹家内斗，喜莲与胡半仙在刑场结婚，双双下酒后殉情而亡。

甄家大小姐，甄太医的妹妹。吴成为了攀附甄太医主动亲近甄依柳，最后成功入赘甄府。甄依柳在吴成的柔情下倍感幸福，为了自己的爱人，傻乎乎的被人利用，心甘情愿倾其所有的为爱人付出，最终却落得悲惨下场。

东汉末年地方官，谯郡县县令，明心的父亲。阻止明心与华佗在一起，并欲将明心许配给丞相董卓的侄子董骠，不久因董骠之死又与曹操结盟，联合对抗董卓。他在董卓与曹操的争斗中内心左右摇摆不定，后来遭人陷害，被曹操下令处死。